Isa sa mga pangunahing bentahe ng cell culture ay ang kakayahang manipulahin ang pisikal na kimika ng cell reproduction (ibig sabihin, temperatura, pH, osmotic pressure, O2 at CO2 tension) at physiological na kapaligiran (ie hormone at nutrient concentration).Bilang karagdagan sa temperatura, ang kapaligiran ng kultura ay kinokontrol ng medium ng paglago.
Kahit na ang pisyolohikal na kapaligiran ng kultura ay hindi kasinglinaw ng pisikal at kemikal na kapaligiran nito, isang mas mahusay na pag-unawa sa mga bahagi ng serum, pagkilala sa mga kadahilanan ng paglago na kinakailangan para sa paglaganap, at isang mas mahusay na pag-unawa sa microenvironment ng mga cell sa kultura.(Ibig sabihin, pakikipag-ugnayan ng cell-cell, pagsasabog ng gas, pakikipag-ugnayan sa matrix) ngayon ay nagpapahintulot sa ilang mga linya ng cell na ma-culture sa serum-free media.
1. Ang kapaligiran ng kultura ay nakakaapekto sa paglaki ng cell
Pakitandaan na ang mga kondisyon ng cell culture ay iba para sa bawat uri ng cell.
Ang mga kahihinatnan ng paglihis mula sa mga kundisyon ng kultura na kinakailangan para sa isang partikular na uri ng cell ay mula sa pagpapahayag ng mga abnormal na phenotype hanggang sa kumpletong kabiguan ng kultura ng cell.Samakatuwid, inirerekomenda namin na maging pamilyar ka sa linya ng cell kung saan ka interesado at mahigpit na sundin ang mga tagubiling ibinigay para sa bawat produktong ginagamit mo sa iyong eksperimento.
2. Mga pag-iingat para sa paglikha ng isang na-optimize na kapaligiran ng kultura ng cell para sa iyong mga cell:
Culture media at serum (tingnan sa ibaba para sa karagdagang impormasyon)
Mga antas ng pH at CO2 (tingnan sa ibaba para sa karagdagang impormasyon)
Magtanim ng plastic (tingnan sa ibaba para sa karagdagang impormasyon)
Temperatura (tingnan sa ibaba para sa karagdagang impormasyon)
2.1 Cultural Media at Serum
Ang medium ng kultura ay ang pinakamahalagang bahagi ng kapaligiran ng kultura, dahil nagbibigay ito ng mga sustansya, mga kadahilanan ng paglago at mga hormone na kailangan para sa paglaki ng cell, at kinokontrol ang pH at osmotic pressure ng kultura.
Bagaman ang mga unang eksperimento sa kultura ng cell ay isinagawa gamit ang natural na media na nakuha mula sa mga extract ng tissue at mga likido sa katawan, ang pangangailangan para sa standardisasyon, kalidad ng media, at pagtaas ng demand ay humantong sa pagbuo ng tiyak na media.Ang tatlong pangunahing uri ng media ay basal media, pinababang serum media at serum-free media, at mayroon silang iba't ibang mga kinakailangan para sa serum supplementation.
2.1.1 Pangunahing midyum
Gibco cell culture medium
Karamihan sa mga cell line ay lumalaki nang maayos sa pangunahing media na naglalaman ng mga amino acid, bitamina, inorganic na salts, at carbon source (gaya ng glucose), ngunit ang mga pangunahing media formulation na ito ay dapat dagdagan ng serum.
2.1.2 Nabawasang serum medium
Bote na may Gibco Low Serum Medium
Ang isa pang diskarte upang mabawasan ang masamang epekto ng serum sa mga eksperimento sa kultura ng cell ay ang paggamit ng serum-reduced media.Ang pinababang serum medium ay isang pangunahing medium na formula na mayaman sa mga sustansya at mga salik na nagmula sa hayop, na maaaring mabawasan ang dami ng kinakailangang serum.
2.1.3 Serum-free medium
Bote na may Gibco serum-free medium
Ang serum-free medium (SFM) ay umiiwas sa paggamit ng animal serum sa pamamagitan ng pagpapalit ng serum ng naaangkop na nutrisyon at mga formulation ng hormone.Maraming pangunahing kultura at mga linya ng cell ang may serum-free medium formulation, kabilang ang Chinese Hamster Ovary (CHO) recombinant protein production line, iba't ibang hybridoma cell lines, insect lines Sf9 at Sf21 (Spodoptera frugiperda), pati na rin para sa The host for virus production (halimbawa, 293, VERO, MDCK, MDBK), atbp. Isa sa mga pangunahing bentahe ng paggamit ng serum-free medium ay ang kakayahang gawing pumipili ang medium para sa mga partikular na uri ng cell sa pamamagitan ng pagpili ng naaangkop na kumbinasyon ng mga growth factor.Ang sumusunod na talahanayan ay naglilista ng mga pakinabang at disadvantages ng serum-free media.
Advantage
Dagdagan ang kalinawan
Mas pare-pareho ang pagganap
Mas madaling purification at downstream processing
Tumpak na tasahin ang function ng cell
Dagdagan ang pagiging produktibo
Mas mahusay na kontrol ng mga physiological reaksyon
Pinahusay na pagtuklas ng cell media
Disadvantage
Mga kinakailangan sa medium na formula ng partikular na uri ng cell
Kailangan ng mas mataas na reagent purity
Paghina sa paglaki
2.2.1 antas ng pH
Karamihan sa mga normal na mammalian cell line ay lumalaki nang maayos sa pH 7.4, at ang mga pagkakaiba sa pagitan ng iba't ibang mga cell line ay maliit.Gayunpaman, ang ilang mga nabagong linya ng cell ay ipinakita na lumago nang mas mahusay sa isang bahagyang acidic na kapaligiran (pH 7.0 - 7.4), habang ang ilang mga normal na linya ng fibroblast cell ay mas gusto ang isang bahagyang alkaline na kapaligiran (pH 7.4 - 7.7).Ang mga linya ng cell ng insekto tulad ng Sf9 at Sf21 ay pinakamahusay na lumalaki sa pH 6.2.
2.2.2 Antas ng CO2
Kinokontrol ng growth medium ang pH ng kultura at itina-buffer ang mga cell sa kultura upang labanan ang mga pagbabago sa pH.Karaniwan, ang buffering na ito ay nakakamit sa pamamagitan ng paglalaman ng organic (halimbawa, HEPES) o CO2-bicarbonate-based na buffer.Dahil ang pH ng medium ay nakasalalay sa maselan na balanse ng dissolved carbon dioxide (CO2) at bicarbonate (HCO3-), ang mga pagbabago sa atmospheric CO2 ay magbabago sa pH ng medium.Samakatuwid, kapag gumagamit ng medium na buffered na may CO2-bicarbonate-based buffer, kinakailangang gumamit ng exogenous CO2, lalo na kapag nag-culture ng mga cell sa open culture dish o nag-culture ng mga transformed cell line sa mataas na konsentrasyon.Bagama't karamihan sa mga mananaliksik ay karaniwang gumagamit ng 5-7% CO2 sa hangin, karamihan sa mga eksperimento sa cell culture ay karaniwang gumagamit ng 4-10% CO2.Gayunpaman, ang bawat medium ay may inirerekomendang CO2 tension at bikarbonate na konsentrasyon upang makamit ang tamang pH at osmotic pressure;para sa karagdagang impormasyon, mangyaring sumangguni sa mga tagubilin ng medium na tagagawa.
2.3 Paglilinang ng mga plastik
Available ang mga plastic ng cell culture sa iba't ibang anyo, sukat at ibabaw upang umangkop sa iba't ibang aplikasyon ng cell culture.Gamitin ang cell culture plastic surface guide at cell culture container guide sa ibaba para matulungan kang pumili ng tamang plastic para sa iyong cell culture application.
Tingnan ang lahat ng Thermo Scientific Nunc cell culture plastics (link sa advertising)
2.4 Temperatura
Ang pinakamainam na temperatura para sa kultura ng cell ay nakasalalay sa isang malaking lawak sa temperatura ng katawan ng host kung saan ang mga cell ay nakahiwalay, at sa isang mas mababang lawak sa mga anatomical na pagbabago sa temperatura (halimbawa, ang temperatura ng balat ay maaaring mas mababa kaysa sa skeletal na kalamnan. ).Para sa cell culture, ang overheating ay isang mas seryosong problema kaysa sa overheating.Samakatuwid, ang temperatura sa incubator ay karaniwang nakatakda nang bahagya sa ibaba ng pinakamabuting kalagayan na temperatura.
2.4.1 Pinakamainam na temperatura para sa iba't ibang linya ng cell
Karamihan sa mga linya ng cell ng tao at mammalian ay pinananatili sa 36°C hanggang 37°C para sa pinakamainam na paglaki.
Ang mga selula ng insekto ay nilinang sa 27°C para sa pinakamainam na paglaki;lumalaki sila nang mas mabagal sa mas mababang temperatura at temperatura sa pagitan ng 27°C at 30°C.Sa itaas ng 30°C, bumababa ang sigla ng mga selula ng insekto, kahit na bumalik ito sa 27°C, hindi na mababawi ang mga selula.
Ang mga linya ng avian cell ay nangangailangan ng 38.5°C upang maabot ang pinakamataas na paglaki.Bagama't ang mga cell na ito ay maaaring panatilihin sa 37°C, sila ay lalago nang mas mabagal.
Ang mga linya ng cell na nagmula sa mga hayop na may malamig na dugo (tulad ng mga amphibian, cold-water fish) ay kayang tiisin ang malawak na hanay ng temperatura na 15°C hanggang 26°C.
Oras ng post: Peb-01-2023