Ang Kontaminasyon sa Cell Culture ay Epektibong Nabawasan

Ang kontaminasyon ng mga cell culture ay madaling maging pinakakaraniwang problema sa mga cell culture laboratories, kung minsan ay nagdudulot ng napakaseryosong kahihinatnan.Ang mga contaminant ng cell culture ay maaaring nahahati sa dalawang kategorya, mga chemical contaminants tulad ng medium, serum at water impurities, endotoxins, plasticizers at detergents, at biological contaminants tulad ng bacteria, molds, yeasts, viruses, mycoplasmas cross infection.Kontaminado ng iba pang mga linya ng cell.Bagama't imposibleng ganap na maalis ang kontaminasyon, ang dalas at kalubhaan nito ay maaaring mabawasan sa pamamagitan ng lubusang pag-unawa sa pinagmulan nito at pagsunod sa mga mahusay na aseptikong pamamaraan.

1. Binabalangkas ng seksyong ito ang mga pangunahing uri ng biyolohikal na kontaminasyon:
Ang kontaminasyon ng bakterya
Kontaminasyon ng amag at virus
Ang kontaminasyon ng Mycoplasma
Ang kontaminasyon ng lebadura

1.1Bacterial contamination
Ang bakterya ay isang malaking grupo ng mga ubiquitous na single-celled microorganism.Ang mga ito ay karaniwang ilang microns lamang ang diyametro at maaaring magkaroon ng iba't ibang hugis, mula sa mga sphere hanggang sa mga rod at spiral.Dahil sa kanilang ubiquity, laki, at mabilis na rate ng paglaki, bacteria, kasama ng yeasts at molds, ay ang pinaka-karaniwang biological contaminants sa cell culture.

1.1.1 Pagtuklas ng Kontaminasyon ng Bakterya
Ang kontaminasyon ng bakterya ay madaling matukoy sa pamamagitan ng visual na inspeksyon ng kultura sa loob ng ilang araw pagkatapos itong mahawa;
Ang mga nahawaang kultura ay kadalasang lumilitaw na maulap (ibig sabihin, malabo), kung minsan ay may manipis na pelikula sa ibabaw.
Ang mga biglaang pagbaba sa pH ng medium ng kultura ay madalas ding nakatagpo.
Sa ilalim ng isang low-power microscope, lumilitaw ang bacteria bilang maliliit, gumagalaw na butil sa pagitan ng mga cell, at ang pagmamasid sa ilalim ng high-power microscope ay maaaring malutas ang mga hugis ng indibidwal na bakterya.

1.2 Kontaminasyon ng amag at Virus
1.2.1 Kontaminasyon ng Amag
Ang mga amag ay mga eukaryotic microorganism ng fungal kingdom na lumalaki sa anyo ng mga multicellular filament na tinatawag na hyphae.Ang mga connective network ng mga multicellular filament na ito ay naglalaman ng genetically identical nuclei na tinatawag na colonies o mycelium.

Katulad ng yeast contamination, ang pH ng kultura ay nananatiling stable sa paunang yugto ng kontaminasyon at pagkatapos ay mabilis na tumataas habang ang kultura ay nagiging mas malala ang impeksyon at nagiging maulap.Sa ilalim ng mikroskopyo, ang mycelium ay karaniwang filamentous, minsan bilang mga siksik na kumpol ng mga spores.Ang mga spores ng maraming amag ay maaaring mabuhay sa lubhang malupit at hindi mapagpatuloy na mga kapaligiran sa panahon ng kanilang dormant phase at naisaaktibo lamang kapag ang mga tamang kondisyon ng paglago ay nakatagpo.

1.2.2 Kontaminasyon ng Virus
Ang mga virus ay mga microscopic infectious agent na kumukuha sa makinarya ng host cell para sa pagpaparami.Ang kanilang napakaliit na sukat ay nagpapahirap sa kanila na makita sa kultura at alisin mula sa mga reagents na ginagamit sa mga laboratoryo ng cell culture.Dahil ang karamihan sa mga virus ay may napakahigpit na mga kinakailangan para sa kanilang mga host, kadalasan ay hindi sila nakakaapekto sa mga kultura ng cell ng mga species maliban sa host.
Gayunpaman, ang paggamit ng mga virus-infected cell culture ay maaaring magdulot ng malubhang panganib sa kalusugan ng mga tauhan ng laboratoryo, lalo na kung ang mga tao o primate cell ay lumaki sa laboratoryo.

Ang impeksyon sa virus sa mga kultura ng cell ay maaaring matukoy sa pamamagitan ng electron microscopy, immunostaining na may isang hanay ng mga antibodies, ELISA, o PCR na may naaangkop na mga viral primer.

1.3 Kontaminasyon ng Mycoplasma
Ang Mycoplasmas ay mga simpleng bacteria na walang mga cell wall, at sila ang pinaniniwalaang pinakamaliit na mga organismo na nagpapakopya sa sarili.Dahil sa kanilang napakaliit na sukat (karaniwang mas mababa sa 1 micron), ang mycoplasma ay mahirap tuklasin hanggang sa maabot nila ang napakataas na densidad at maging sanhi ng pagkasira ng mga kultura ng cell;Hanggang sa panahong iyon, karaniwang walang malinaw na senyales ng impeksiyon.

1.3.1 Pagtuklas ng kontaminasyon ng mycoplasma
Ang ilang mabagal na lumalagong mycoplasmas ay maaaring manatili sa mga kultura nang hindi nagiging sanhi ng pagkamatay ng cell, ngunit binabago nila ang pag-uugali at metabolismo ng mga host cell sa mga kultura.

Ang talamak na impeksyon sa mycoplasma ay maaaring nailalarawan sa pamamagitan ng pinababang rate ng paglaganap ng cell, nabawasan ang density ng saturation at agglutination sa kultura ng suspensyon.
Gayunpaman, ang tanging maaasahang paraan upang matukoy ang kontaminasyon ng mycoplasma ay ang regular na pagsubok sa kultura gamit ang fluorescent staining (hal., Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, autoradiography, o microbial testing.

1.4 Kontaminasyon ng lebadura
Ang mga yeast ay mga single-celled eukaryote ng fungal kingdom, na may sukat mula sa ilang microns (karaniwan) hanggang 40 microns (bihirang).

1.4.1Pagtuklas ng kontaminasyon ng yeast
Tulad ng kontaminasyon ng bacterial, ang mga kulturang kontaminado ng yeast ay maaaring maging maulap, lalo na kung ang kontaminasyon ay nasa advanced na yugto.Ang pH ng mga kulturang kontaminado ng lebadura ay napakaliit na nagbabago hanggang sa lumala ang kontaminasyon, kung saan ang yugto ay karaniwang tumataas ang pH.Sa ilalim ng mikroskopyo, lumilitaw ang lebadura bilang mga indibidwal na ovoid o spherical na particle at maaaring makagawa ng mas maliliit na particle.

2.Impeksyon sa krus
Bagama't hindi kasingkaraniwan ng microbial contamination, ang malawak na cross-contamination ng maraming cell line na may HeLa at iba pang mabilis na lumalagong cell line ay isang malinaw na tinukoy na problema na may malubhang kahihinatnan.Kumuha ng mga linya ng cell mula sa mga kagalang-galang na cell bank, regular na suriin ang mga katangian ng mga linya ng cell, at gumamit ng mahusay na mga diskarte sa aseptiko.Tutulungan ka ng mga kasanayang ito na maiwasan ang cross-contamination.Ang DNA fingerprinting, karyotyping at isotyping ay maaaring makumpirma kung mayroong cross-contamination sa iyong cell culture.

Bagama't hindi kasingkaraniwan ng microbial contamination, ang malawak na cross-contamination ng maraming cell line na may HeLa at iba pang mabilis na lumalagong cell line ay isang malinaw na tinukoy na problema na may malubhang kahihinatnan.Kumuha ng mga linya ng cell mula sa mga kagalang-galang na cell bank, regular na suriin ang mga katangian ng mga linya ng cell, at gumamit ng mahusay na mga diskarte sa aseptiko.Tutulungan ka ng mga kasanayang ito na maiwasan ang cross-contamination.Ang DNA fingerprinting, karyotyping at isotyping ay maaaring makumpirma kung mayroong cross-contamination sa iyong cell culture.